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病毒研究用水系列三:如何獲得完美的核酸電泳條帶
點(diǎn)擊次數(shù):2492 更新時(shí)間:2020-05-13

在冠狀病毒2019-nCoV的分子生物學(xué)研究中,電泳技術(shù)是一個(gè)重要方法,主要用于核酸、蛋白質(zhì)的分離與鑒定,使用的實(shí)驗(yàn)儀器主要是電泳儀。本文,樂(lè)楓純水為大家總結(jié)了實(shí)驗(yàn)中常出現(xiàn)的問(wèn)題和解決方法。

新冠病毒研究?jī)x器用水

一、什么是核酸電泳?

    核酸電泳是基因操作的核心技術(shù)之一,用于分離、鑒定DNA、RNA 分子混合物和純化DNA小片段。

二、核酸電泳異常條帶問(wèn)題 

    核酸電泳實(shí)驗(yàn)中,常常會(huì)遇到條帶模糊、拖尾、扭曲等現(xiàn)象,究其原因,除了操作不當(dāng),電泳條件未優(yōu)化,電泳緩沖液也是重要的影響因素之一。電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA的電泳遷移率。

異常電泳條帶

 

表1 核酸電泳條帶異常的原因匯總及建議的解決方法

 

常見(jiàn)問(wèn)題

原因

解決方法

條帶模糊

核酸降解

使用不含核酸酶的超純水配置緩沖液

電泳緩沖液陳舊

建議經(jīng)常更換緩沖液

有蛋白污染

使用低有機(jī)物的超純水配置緩沖液

核酸變性

使用超純水或者緩沖液稀釋樣品

條帶黯淡

核酸濃度過(guò)低

增加上樣量

核酸降解 

使用不含核酸酶的超純水配置緩沖液

條帶被示蹤染料掩蓋

避免使用與目的片段遷移率相同的示蹤染料

拖帶或涂抹帶

PCR體系或PCR程序不合適

優(yōu)化PCR體系和PCR程序

條帶扭曲

配膠緩沖液和電泳緩沖液不同

配膠和電泳中使用同一批緩沖液

電泳時(shí)電壓過(guò)高

控制電泳時(shí)電壓不超過(guò)6V/CM

三、核酸電泳用純水要求

    為了防止水中雜質(zhì)(如:核酸酶、蛋白質(zhì)、離子等)對(duì)電泳結(jié)果的影響,核酸電泳實(shí)驗(yàn)配置緩沖溶液或稀釋樣品需要使用超純水:

● 電阻率 18.2 MΩ·cm

●TOC < 10 ppb

● 無(wú)核酸酶

● 細(xì)菌總數(shù)< 1 CFU/mL

● 熱原< 0.005 EU/mL

● 0.22 μm 或更低的顆粒過(guò)濾

四、核酸電泳用純水機(jī)推薦

    樂(lè)楓生物新一代Genie系列智能純水系統(tǒng)是一款專注于解決用戶需求的實(shí)驗(yàn)室純水機(jī)。Genie系列智能純水系統(tǒng)采用樂(lè)楓理念——無(wú)線連接、“1+N”模式,具有系統(tǒng)智能化、設(shè)計(jì)人性化、水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化三大特色。

廣州某疾控中心安裝的Genie G

廣州某疾控中心安裝的Genie G以自來(lái)水為進(jìn)水產(chǎn)EDI純水和超純水

荷蘭安裝的Genie U

荷蘭安裝的Genie U以自來(lái)水為進(jìn)水產(chǎn)RO純水和超純水

穩(wěn)定可靠的水質(zhì)

• 集合優(yōu)化的流路設(shè)計(jì)、技術(shù)先進(jìn)的 EDI 模塊和樂(lè)楓LeFil 和OrganeFil 配方填料的超純化柱,純水和超純水水質(zhì)達(dá)到或超過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)室用水標(biāo)準(zhǔn);

• 配備RephiBio 終端過(guò)濾器,可有效去除水中的熱原(內(nèi)毒素)、核酸酶、細(xì)菌等雜質(zhì),滿足核酸電泳實(shí)驗(yàn)用水要求。

用戶體驗(yàn)佳

• 觸控屏采用高靈敏度防水屏幕,可帶乳膠手套操作

• 采用智能IT技術(shù),取水手柄與主機(jī)可無(wú)線連接,取水點(diǎn)與主機(jī)的距離不受電線長(zhǎng)度的限制,讓您享受“無(wú)線 · 自由”的用水體驗(yàn);

• 遠(yuǎn)程取水終端的手柄設(shè)計(jì)符合人體工學(xué),升降只手操作;亦可實(shí)時(shí)查看水質(zhì)信息,完成手動(dòng)取水或定量取水等操作

    隨著國(guó)內(nèi)疫情形勢(shì)逐步好轉(zhuǎn),全國(guó)各地高校陸續(xù)公布了學(xué)生返校復(fù)課時(shí)間,宅在家中那么久的你,是不是突然變得不安起來(lái)?不要慌,超實(shí)用的實(shí)驗(yàn)室純水應(yīng)用小技巧“助你成功”! 

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關(guān)于樂(lè)楓生物

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